在 PCR Song 中,比較難明的有以下幾句:
Said you can amplify in vitro just as well.
Just mix your template with a buffer and some primers,
Nucleotides and polymerases, too.
Denaturing, annealing, and extending.
Well it's amazing what heating and cooling and heating will do.
...
PCR, when you need to recombine.
In vitro 是拉丁文,字面解作「在玻璃內」,實際上就是「在試管內」的意思。Template(模板)指的是用來複製的 DNA 樣本。Buffer 解作緩衝液,是一些用來保持 PCR 穩定的有機化合物。Recombine 指重組 DNA,是一種基因改良的手段。
Primer (引子)是人工合成的短 DNA 片斷,nucleotide 指的其實是 dNTP (deoxynucleotide triphosphate, 去氧核甘三磷酸),而 polymerase 指的是 DNA polymerase(DNA 聚合酶),這三者都是用來複製 DNA 的主要成份。
在理想的情況之下,PCR 會把 DNA 的數目由一變二,二變四…如此類推地擴增下去。這樣,即使起初樣本內只有一對 DNA 鏈,在經過二三十個循環之後,也可得到數以億計的樣本。而每一個循環可以分為三個階段,即 denaturing, annealing 和 extending。每個階段所需的溫度和時間都不同,而熱循環器 (thermal cycler) 所做的其實只是維持每個循環中每個階段所需的溫度和時間,其餘的化學反應會自然發生。這好比煲湯,當我們下了材料 (template + primer + dNTP + DNA polymerase + buffer) 之後,剩下的便是睇火了。所以說穿了,熱循環器其實不過是 a combination of timer, heater and refrigerator 而已,並不是甚麼高科技的東西。
沒有留言:
發佈留言